期刊简介
综合性医学学术性期刊(国家科技部统计源期刊、中国科技核心期刊)， 旨在传播医学新理论，交流医学新技术，面向临床，重点在实用。本刊读者对象为各级临床医护人员。报道的内容为全国各地医学科研成果、临床实践和实用性较强的新技术、新方法。
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首页>实用医学杂志
- 杂志名称：实用医学杂志
- 主管单位：广东省卫生厅
- 主办单位：广东省医学情报研究所
- 国际刊号：1006-5725
- 国内刊号：44-1193/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国科技论文统计源期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
重组慢病毒CD133-miR30-shRNA的构建及抗肝癌细胞生长的作用
牛坚；王月；刘斌
关键词：肝肿瘤, 干细胞, CD133, 细胞增殖, 基因表达, 慢病毒
摘要：目的：构建沉默CD133基因的miR30-CD133慢病毒，探讨其对肝癌细胞株SMMC7721生物学行为的影响。方法：针对已经筛选确定的 CD133基因干扰有效序列，合成靶序列的 Oligo DNA ，与 pPRIME 载体连接。用 pPRIME-miR30-CD133、psPAX2和 pMD2G 3种质粒共转染293T 细胞，包装产生慢病毒，测定病毒滴度；荧光显微镜下测定病毒感染效率；qRT-PCR、Western blot 检测 CD133表达；CCK-8法检测细胞生长；annexinV／PI检测细胞凋亡。根据实验要求（1）Blank组；（2）shNC组；（3）shCD133组。结果：病毒滴度为6．58×109 PFU／mL，病毒感染效率为（80．8±9．1）％。 qRT-PCR结果显示sh CD133组相对Blank 组的CD133表达量的平均值为0．18±0．04，sh CD133组相对Blank 组和shNC 组有显著的 CD133敲减作用（P ＜0．05）。 Western blot结果显示sh CD133组的CD133表达明显下降，约为shNC组的10％（P ＜0．05）和Blank组的8％（P ＜0．05）。重组慢病毒抑制肝癌细胞生长，与Blank 组（25．3％）、shNC 组（24．3％）相比，sh CD133组凋亡细胞比例（41．3％）显著增加（P ＜0．05）。结论：成功构建慢病毒PRIME-miR30-CD133，为CD133基因的功能研究提供了工具。
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